1 基本說(shuō)明

DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的生物工程菌株，在使用pUC系列質(zhì)粒載體進(jìn)行DNA轉(zhuǎn)化時(shí)， 由于載體DNA產(chǎn)生的LacZα多肽和DH5α編碼的lacZ△M15相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)α-互補(bǔ)性，從而顯示β-半乳糖苷酶活性。利用這一特性，可以很容易利用藍(lán)白斑篩選鑒別重組體菌株。

本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細(xì)胞。本產(chǎn)品被用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)到10⁸cfu/ug。

2 基因型

F - φ80lacZΔM1 5 Δ(lacZYA-argF) U1 69 deoR recA1 endA1 hsdR1 7 (r k - , m k + ) phoA supE44 λ - thi-1 gyrA96 relA1

3 儲(chǔ)存及使用環(huán)境

本產(chǎn)品應(yīng)保存在-70℃，不可反復(fù)凍融或放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，否則會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

進(jìn)行轉(zhuǎn)化過(guò)程中，請(qǐng)根據(jù)相應(yīng)溫度及無(wú)菌條件的要求進(jìn)行。

操作方法

請(qǐng)按照無(wú)菌條件標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行以下操作：

1. 取感受態(tài)細(xì)胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨?xì)胞懸液分裝到無(wú)菌預(yù)冷的離心管中置于冰浴中。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞的建議用量為50μl可以根據(jù)實(shí)際情況分裝使用，應(yīng)注意所用DNA體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一。以下實(shí)驗(yàn)以100μl感受態(tài)細(xì)胞為例。）

2. 向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入目的DNA，100μl的感受態(tài)細(xì)胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA（或者10μl以下的連接產(chǎn)物）所飽和，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中使細(xì)胞冷卻2-3分鐘該過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

4. 向每個(gè)離心管中加入500μl無(wú)菌的LB培養(yǎng)基或者SOC培養(yǎng)基，混勻后置37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘，目的是使菌體復(fù)蘇，并使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)。

5. 復(fù)蘇的菌體混勻后，吸取100ul均勻涂布于含相應(yīng)抗生素的LB固體平板上，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時(shí)。
（涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預(yù)計(jì)的克隆較少可通過(guò)離心4000rpm 2分鐘后吸除部分培養(yǎng)液，重新懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。涂布剩余的菌液可置于4℃保存如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過(guò)少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板。）

注意事項(xiàng)與售后服務(wù)

1. 請(qǐng)保證感受態(tài)細(xì)胞正確儲(chǔ)存在-70℃低溫環(huán)境。

2. 請(qǐng)保證轉(zhuǎn)化操作的無(wú)菌環(huán)境。

3. 如果問(wèn)題產(chǎn)生是由于感受態(tài)本身質(zhì)量造成的，我們將免費(fèi)上門替換。

如果您在感受態(tài)使用過(guò)程中發(fā)現(xiàn)任何問(wèn)題，或者需要一些突發(fā)狀況的的解決方案，您可以隨時(shí)聯(lián)系我們！